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      基因組DNA快速提取試劑盒(N1111-N1112)

      促銷: 572.00~1021.00

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      N1111(50次) N1112(100次)

      基因組DNA快速提取試劑盒(矽膠膜離心柱法)

      產品組分

       

      貨號

      N1111

      50次)

      N1112

      100次)

      消化緩衝液DS

      15 ml

      30 ml

      裂解液MS

      20 ml

      40 ml

      蛋白酶K20mg/ml

      1 ml

      2 ml

      去蛋白液PS

      30 ml

      60 ml

      漂洗液PE

      15 ml

      30 ml

      純化液TE

      5 ml

      10 ml

      DNA純化柱

       50

       100

      說明書

      1

      1

       

      裂解液MS中含變性劑,請不要直接接觸皮膚。

      漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,

      即含75%乙醇。

      產品說明

      本產品可用於昆蟲、線蟲、動物等樣本的基因組DNA純化。純化原理是利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA,由矽膠膜柱可逆吸附體係中的基因組DNA,經蛋白酶K消化、漂洗液清洗除去蛋白質、脂質以及多糖等雜質,用純化液洗脫獲得基因組DNA。一次可從不超過10 mg組織材料中提取到3-35 μg的高純度基因組DNAOD260/OD280=1.7-1.9),此基因組DNA可直接用於PCR、酶切等後續實驗。

       

      質量控製

      純化的基因組DNA質量通過限製性酶切和單拷貝基因的PCR擴增鑒定。

       

      保存條件

      蛋白酶K室溫運輸,於-20保存,避免反複凍融。

      其餘試劑置於室溫(15-25)幹燥條件下保存1年。

      如果消化緩衝液DSMS中有沉澱,可在55加熱溶解,待恢複室溫後混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。

       

      注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

      漂洗液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入3倍體積的無水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml無水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml無水乙醇,使用後立即蓋緊蓋子。

      消化緩衝液DS和裂解液MS室溫保存可能會有沉澱產生,在55℃加熱溶解,待恢複至室溫後混勻即可使用。不會影響基因組DNA純化效率。

      應盡量使用新鮮的實驗材料,確保提取的基因組DNA不被降解。不能立刻提取基因組DNA 的實驗材料應盡快置於液氮或-80℃冰箱中保存並避免反複凍融。

      使用液氮研磨組織材料時,應隨時加入液氮,確保提取的基因組DNA不被降解。

      基因組DNA需長期保存時,建議使用純化液TE。用無菌的離心管分裝後保存於-20℃-80℃。

      所有離心步驟均為室溫下進行。

      請嚴格按照操作步驟操作。

       

      操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

      取少量樣本材料,放入液氮預冷的研缽中。快速用力研磨的同時加入少量液氮,直至樣本材料被研磨成粉末。將研磨好的樣本轉移至1.5 ml離心管中,每管組織材料含量應不超過10 mg。

      如沒有液氮,可用剪刀剪成小塊,放入研缽或勻漿器中,加入適量TEpH 8.0),處理成細胞懸液。將不超過10 mg當量的細胞懸液轉移至一個新的1.5 ml的離心管中,12,000 rpm離心1min,棄上清,收集沉澱。

          每隻離心管中的樣本當量不宜超過10 mg。每10 mg樣本材料可獲得10 μg基因組DNA。樣本量過大,將會影響細胞核裂解效率並可能堵塞純化柱,進而降低基因組DNA的得率與純度。

      加入200 μl消化緩衝液DS,渦旋振蕩至形成完全均一的懸浮液。

          如需去除RNA,可加入4 μl RNase A100 mg/ml,N9042),振蕩15秒,室溫放置5min。

      加入20 μl蛋白酶K,混勻,55℃水浴或金屬浴,至組織完全溶解,通常需要1-3小時。對特別難溶解的組織如尾巴、昆蟲可放置過夜。

      加入220 μl裂解液MS,渦旋振蕩混勻。65℃溫浴10min。溶液應變清亮,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠,室溫放置5min使溶液冷卻。

          加入裂解液MS時可能會產生白色沉澱,一般65℃放置時會消失,不會影響後續實驗。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不徹底,可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不純。       

      加入220 μl無水乙醇,上下顛倒混勻。此時可能出現絮狀沉澱。簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。將溶液及絮狀沉澱轉移到純化柱中。12,000 rpm離心1min,棄濾液。

         若溶液體積大於純化柱容積(700 μl),可分兩次離心。

      此時基因組DNA被吸附於DNA純化柱中的矽膠膜上。

      加入500 μl去蛋白液PS,12,000 rpm離心1min,棄濾液。

        此步驟的作用是去除矽膠膜上吸附的蛋白、脂質等雜質,以獲得高質量基因組DNA。

      加入500μl漂洗液PE,12,000 rpm離心1min,棄濾液。

        漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,即含75%乙醇。

      加入500 μl漂洗液PE,12,000 rpm離心1min,棄濾液。

      9  12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。

          此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響後續的酶促反應(PCR或酶切)。同時利於基因組DNA充分溶解。

      10  將純化柱置於新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處,懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。

      11  12,000 rpm離心2min,管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

          洗脫液TE可用去離子水代替,但其pH需為8.0-8.5。

      對洗脫液TE 65℃預熱,會提高基因組DNA的產量。


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