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      DNA凝膠回收試劑盒(N1071-N1072-N1073)

      促銷: 312.00~1066.00

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      N1071(50次) N1072(100次) N1073(200次)

      DNA凝膠回收試劑盒

       

      產品組分

       

      貨號

      N1071

      50次)

      N1072

      100次)

      N1073

      200次)

      溶液BD

      20 ml

      40 ml

      80 ml

      溶液PE

      15 ml

      15 ml×2

      20 ml×3

      溶液Eluent

      2.5 ml

      5 ml

      10 ml

      DNA純化柱

      50

      100

      200

      說明書

      1

      1

      1


      溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

      溶液BD中含有變性劑,請不要直接接觸皮膚。

      上述產品組分均可單獨購買,詳見產品索引。

      產品說明

      本產品采用了經典的矽膠膜技術,用於從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段(50 bp-10 kb),也適合從PCR產物、酶促反應液中回收DNA,也可用於基因組DNA等樣品的純化。其純化原理是含有目的片段的瓊脂糖凝膠溶解後,矽膠膜柱高效可逆地吸附體係中的DNA片段(高鹽、低pH值),蛋白及其它雜質不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低鹽、高pH值條件下再被洗脫純化。一次可回收30μg高純度DNA片段,此DNA片段可直接用於各種酶促反應等。

       

      質量控製

      1 % TAE瓊脂糖凝膠中純化50 bp、1,000 bp、10,000 bpDNA片段。

       

      保存條件

      室溫保存2年。

       

      注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

      溶液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入4倍體積的無水乙醇,即15 ml溶液PE中加入60 ml無水乙醇,20 ml溶液PE中加入80 ml無水乙醇,使用後立即蓋緊蓋子。

      本產品對電泳使用的瓊脂糖種類沒有嚴格限製。為了保證回收DNA的質量和回收效率,盡量使用高純度的瓊脂糖。

      電泳時請使用新鮮配製的TAE電泳緩衝液,以免影響電泳及回收效果。TBE電泳緩衝液中的硼酸與瓊脂糖相互作用生成的複合物會影響DNA的回收效率,因此TBE凝膠電泳不適合用於DNA回收。

      請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰後進行切膠回收,以免回收到多餘雜帶。

      為提高DNA回收收率,切膠時應盡量除去多餘的膠塊。

      本試劑盒純化柱的DNA吸附能力強。但如果DNA濃度小或DNA初始量少,回

      收率將會偏低。

      溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直

      接用於各種酶促反應等,不會影響後續試驗。

      為了保證回收效率,請不要使用未調整pH值的超純水洗脫目的片段。

      請嚴格按照操作步驟操作。


      操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

      切取含有目的DNA片段的瓊脂糖凝膠條帶。

      盡量切除不含有目的DNA部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA回收率。

      切膠時,請使用長波長UV360 nm)光盒。且不要將DNA長時間暴 露在紫外燈下,以防DNA損傷。

      稱取凝膠的重量,近似地確定其體積。

      凝膠重量的稱量方法:取1.5 ml2 ml離心管,用電子天平稱其初質量,切膠裝在離心管後稱終質

      量,兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量有差異,因此,每個離心管的重量需單獨稱量。

      按照每100 mg瓊脂糖凝膠對應100 µl溶液BD的比例,向離心管中加入溶液BD。

      4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝膠完全融化。期間需要顛倒混合3次。

      瓊脂糖必須完全融化,以免堵塞柱子,嚴重影響DNA片段的回收效率。

      如果總體積大於500 µl,可適當增加溶膠時間。

      若此時溶液變紅,可加10 µl 3M NaAcpH 5.2)。

      如要從反應液中回收DNA,則向反應液中加入等體積的BD,充分混勻,後續步驟相同:

      將步驟4所獲溶液置於DNA純化柱中,靜置2min。

      膠塊完全溶解後最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結合DNA的能力     較弱。

      ●  如果所獲溶液過多,超過DNA純化柱容積(700 μl),可分次加入DNA純化柱中。

      6  12,000 rpm離心1min。若溶液體積大於DNA純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。

      此時DNA片段被吸附於DNA純化柱中的矽膠膜上。

      加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

      溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

      此步驟的作用是將矽膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫,以獲得高質量的DNA片段。

      加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

      9  12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中的液體。

      此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響後續酶促反應。同時也利於DNA片段的充分溶解。

      10  將離心柱置於新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處,懸空滴加30-100 µl溶液Eluent60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DNA片段。貯存於-20℃。

      溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的片段的多少、 用戶對目的片段濃度要求而定。

      對溶液Eluent 65℃預熱,會提高提取DNA目的片段的產量。



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