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      Taq Plus DNA聚合酶(P1031-P1032-P1033-P1034)

      促銷: 156.00~650.00

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      P1031(250U) P1032*(250U) P1033(1000U) P1034*(1000U)

      Taq Plus DNA聚合酶

      Cat. #:P1031,P1032,P1033,P1034

      產品簡介

      Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶與Pfu DNA聚合酶的獨特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍,擴增片段的長度可達20 kb(簡單模板)。在擴增複雜模板(如GC-rich或重複序列)時,Taq Plus DNA聚合酶的擴增效率高於Taq DNA聚合酶,可用於複雜模板的PCR擴增。延伸速度為20s/kb70~75℃,簡單模板可達5s/kb)。擴增產物具有兩種末端:平末端與3'-dA。

      產品組成

      Component

      P1031

      250U

      P1032

      250U

      P1033

      1,000U

      P1034

      1,000U

      Taq Plus DNA聚合酶(5U/μl[1]

      50 μl

      50 μl

      200 μl

      200 μl

      Taq Plus DNA聚合酶(2.5U/μl[1]

      100 μl

      100 μl

      400 μl

      400 μl

      10× Tpol BufferMg2+ Plus[1]

      1.25 ml

      1.25 ml

      1.25 ml × 4

      1.25 ml × 4

      6× Loading Buffer[2]

      1 ml

      1 ml

      1 ml

      1 ml

      dNTPs2.5mM[3]

      -

      1 ml

      -

      1 ml × 4

      [1] 提供5U/μl2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇,如無特別說明默認5U/μl。

      [2] 10× Tpol Buffer分為Mg2+ PlusMg2+ Free兩種包裝,可方便選擇。如無特別說明提供10× Tpol BufferMg2+ Plus)。Mg2+ Free10× Tpol Buffer提供25 mM MgSO4。提供5U/μl2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇,如無特別說明默認5U/μl。

      [3] 6× Loading Buffer,如有需要可單獨購買(Cat. #:M9041)。

      [4] dNTPsdATP、dGTP、dCTPdTTP等摩爾混合物,P1011/P1013不含dNTPs,如有需要請單獨購買(Cat. #: P9011/P9012/P9013)。

      活性定義

      一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

      保存條件

      -20℃保存2年。

      質量控製

      純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶汙染。

      功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘餘DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

      應用舉例

      1. 配製反應體係

      請於冰上配置反應體係,體係大小與組分用量與添加順序可調整:

      Ordinal

      Component

      Volume

      (50 μl reaction volume)

      Final   concentration

      (50 μl reaction volume)

      1

      10× Tpol BufferMg2+ Plus

      5 μl

      2

      dNTPs2.5mM

      4 μl

      0.4 mM

      3

      upstream primer (10 μM)[1]

      2 μl

      0.4 μM

      4

      downstream primer (10 μM)[1]

      2 μl

      0.4 μM

      5

      Taq Plus DNA聚合酶(5U/μl[2]

      0.5 μl

      2.5U

      6

      template DNA[3]

      1-4 μl

      <1μg

      7

      超純水[4]

      To 50 μl

      -

      optional

      MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[6]

      Variable

      -

      [1] 引物終濃度建議範圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

      [2] 根據目的片段擴增的難易程度調整酶的用量。

      [3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體係)。

      Template

      Dosage

      人類基因組DNA

      0.1μg-1μg

      λDNA

      0.5ng-5ng

      大腸杆菌基因組DNA

      10ng-100ng

      質粒DNA

      0.1ng-10ng

      [4] 可單獨訂購超純水(Cat. #:P9021/P9022/P9023)。

      [5] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #:P9031)和PCR EnhancerCat. #:P9041)。

      2. 設定反應程序進行PCR反應

      Stage

      Temperature

      Time

      Number of Cycles

      Initial Denaturation

      94℃

      3 min

      1

      Denaturation

      94℃

      30 sec

      25-35

      Annealing

      55-68℃[1]

      30 sec

      Extension

      72℃

      Variable[2]

      Final Extension

      72℃

      5-10 min

      1

      [1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

      [2] 延伸時間按20s/kb來設最佳(簡單模板可達5s/kb)。

      3. 分析結果

      將產物與loading buffer混勻後進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

      無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑製劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑製擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)後使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #:P9041、MgCl2Cat. #:P9031等可提高產量。

      操作注意事項

      1 室溫下Taq Plus DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請於冰上配置反應體係,並且最後添加Taq Plus DNA聚合酶或模板DNA。

      2 Taq Plus DNA聚合酶的擴增產物有兩種末端:平末端和3'-dA突出末端。如要進行TA克隆,請先進行加A反應,以提高克隆效率。(加A反應:參考如下體係,72℃,15-30min

      PCR(純化)產物

      1-7 μl

      10× Taq BufferMg2+ Plus

      1 μl

      dATP

      0.2 mM

      Taq DNA聚合酶

      5U

      超純水

      To 10 μl

      引物設計注意事項

      引物長度一般在15-30個堿基之間;上下遊引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重複的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控製在40-60%,且上下遊引物GC含量盡量接近;Tm值控製在55-65℃之間,且上下遊引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

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      貨號

      規格

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